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Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Dottoranda Elisa Piscianz Tutore Dr. Marco Rabusin Dottorato di Ricerca in MEDICINA.

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Presentazione sul tema: "Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Dottoranda Elisa Piscianz Tutore Dr. Marco Rabusin Dottorato di Ricerca in MEDICINA."— Transcript della presentazione:

1 Attivazione e deplezione selettiva di linfociti antigene-specifici Dottoranda Elisa Piscianz Tutore Dr. Marco Rabusin Dottorato di Ricerca in MEDICINA MATERNO INFANTILE, PEDIATRIA DELLO SVILUPPO E DELLEDUCAZIONE, PERINATOLOGIA direttore: prof. A. Ventura XXIV Ciclo

2 Trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT) trapianto cellule del donatore Ag viralialtri Agcellule staminali attecchimento ricevente cellule infettate GvI GvT cellule tumorali GvHD cellule del ricevente cellule target

3 Obiettivi dello studio attivazione delle cellule Ag-specifiche inibizione o killing delle cellule attivate Identificare le condizioni migliori per: Mettere a punto un metodo per identificare e depletare i linfociti T allo-reattivi entro ore risparmiare le cellule resting

4 cellule allo-geniche da donatore Mixed Leukocyte Reaction (MLR) cellule stimolatrici linfociti responder dal ricevente LCL-EBV cellule dendritiche farmaci Analisi: vitalità: 7AAD proliferazione: 3H-Thy, CFSE allo-deplezione specifica

5 Farmaci Folate methabolism inhibition Methotrexate (Genestier L, J Clinical Investigation, 1998) JAK pathway inhibition Tasocitinib (Manshouri T, Cancer Science, 2008) Membrane electron transport inhibition Phenoxodiol (Herst PM, Haematologica, 2009) GSH depletion 3-HAA (Lee SM, Immunology Letters, 2010) Proteasome inhibition Bortezomib (Blanco B, Blood, 2006)

6 Screening dei farmaci 3-HAA metabolita Trp (IDO enzyme) deplezione GSH associazione con MnCl 2 (Hiramatsu R, J Cellular Biochemistry, 2008) tossicità cellule resting killing cellule attivate Bortezomib inibitore del proteosoma compromette via IFk – NF-kB

7 3-HAA e MnCl 2 Piscianz et al, Int. Immunopharmacol stimolazione con LCL-EBV deplezione con 3-HAA/MnCl 2 vitalità: 7AAD 60 ore proliferazione: 3H-Thy

8 3-HAA, MnCl 2, Bortezomib Piscianz et al, Int. Immunopharmacol stimolazione con LCL-EBV deplezione con 3-HAA/MnCl 2 /Bortezomib vitalità: 7AAD 60 ore proliferazione: 3H-Thy

9 Stimolazione con DCs e deplezione con farmaci MLR MLR + 3-HAA/MnCl 2 PHA non stimolato PHA + 3-HAA/MnCl 2 non stimolato + 3-HAA/MnCl 2

10 Test di re-stimolazione stimolazione con DCs deplezione con 3-HAA/MnCl 2 re-stimolazione (DCs 1st e DC 3rd) 60 ore vitalità : 7AAD 60 ore proliferazione: CFSE

11 Conclusioni e prossimo futuro… metodo attuabile somministrazione/associazione dei farmaci modulabile risposta a patogeni Treg emivita dei farmaci dopo deplezione


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