METODO ENZIMATICO DI SANGER Vengono allestite delle reazioni di PCR particolari con un singolo primer e in ciascuna delle quali è presente un reagente.

METODO ENZIMATICO DI SANGER Vengono allestite delle reazioni di PCR particolari con un singolo primer e in ciascuna delle quali è presente un reagente in più: DIDEOSSINUCLEOTIDE Quando la DNApolimerasi incorpora nel nuovo filamento un dideossinucleotide la sintesi si blocca  TERMINATORI

Per ogni posizione in alcune nuove molecole si inserisce un deossinucleotide  la sintesi del filamento continua In altre molecole si inserisce un dideossinucleotide  la sintesi del filamento si blocca In ogni tubo di reazione si possono formare diversi possibili frammenti:

SEQUENZIAMENTO AUTOMATICO TRAMITE BIGDYE TERMINATOR KIT  si usano dideossinucleotidi coniugati a composti a composti fluorescenti la separazione dei frammenti e la lettura della sequenza vengono fatte automaticamente  SEQUENZIATORE AUTOMATICO

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